EBV- latenssit ( C Borenström , Theses)

Otan taas muistiinpanoista esiin EBV-viruksen, koska se voi aktivoitua influensaviruksesta, mahdollisesti nimittäin.

EBV viruksesta ( Herpesvirus 4)

LÄHDE. Boreström Cecilia. Regulation of Epstein-Barr virus C promoter by the OriP-EBNA1 complex.
ISBN 978-91-628-7557-2

Asian avainsanoja ovat: Epstein-Barr virus, EBV

EBNA1 (EBV nuclear antigens) Viruksen transkriptiotekijä
NF-Y, Nuclear transcription factor Y
Sp1, Specificity protein 1
Oct-2 ( ihmisen transcriptiotekijä, octamer binding sites)

Geenit jotka kontrolloivat immunoglobuliinien geenien uudelleen järjestäytymistä kautta laajan igh locuksen ja ovat tärkeitä n-lymfosyyttien kehityksen säätelylle.
OCT1 ja 2 transkriptiotekijät ovat tässä tärkeitä eri vaiheissa. ( Asiaa tutkii Stephanie Pritchard-Peter Brodeur 2008)
www.tufts.edu/sackler/mstp/research%20project...
Bright= B-Cell regulator of IgH transcriptionfactor
E2F1 transcriptional regulation
Cp, eräs EBV viruksen vaihteista C promoter.


EBV omaa kyvyn käyttää kolmea eri vaihdetta kolmeen eri latenssiin I, II, III.
http://www.brown.edu/Courses/Bio_160/Projects2000/Herpes/EBV/EBVLC.jpg
Kun EBV ei ole latenteissa vaiheissan, se on lyyttisessä vaiheessa.

Sen kolme promoottoria ovat Qp, Cp ja Wp.

http://www.nature.com/nm/journal/v8/n10/images/nm1002-1086-F1.gif

Ensimmäinen promoottori Qp on käytössä terveillä EBV-viruksen kantajilla, kun virus on kaikkein parhaiten restriktiossaan latenssissaan lepäävissä B-muistisoluissa.

Cp ja Wp promoottorien käyttöä havaitaan, kun alkaa jatkuva proliferaatio (immortalisaatio) ja lymboblastoidien muodostus.

Wp promoottorin käyttö aiheuttaa yhdeksän latentin geenin transkription alkamisen. Nämä ovat EBNA 1-6, joita tuottuu suoraan Wp vaikutuksesta ja EDNA 2, jonka vaikutuksesta alkaa tuottua LMP1, LMP2A ja LMP2B.

oriPI-EDNA1 kompleksi vaikuttaa Wp-Cp vaihteen.

TAUSTAA EBV-viruksesta
EBV virus on yksinomaan ihmisvirus ja se on lymfotrooppinen herpesviruksiin kuuluva ja on infektoinut suurimman osan ihmiskuntaa 90 prosenttisesti kautta maailman.
Primäärinen infektio tapahtuu tavallisesti varhaisina elinvuosina eikä johda mihinkään tunnistettavaan tautiin.

Mutta EBV on myös infektoivan mononukleoosin aiheuttava agenssi.
http://www.terveyskirjasto.fi/terveyskirjasto/tk.koti?p_artikkeli=pot00107

EBV-virukseen liittyy myös pahanlaatuisuuksia
kuten Burkittin lymfooma (BL) http://en.wikipedia.org/wiki/Burkitt%27s_lymphom

Hodgkinin tauti (HD),
http://www.solunetti.fi/se/patologia/hodgkinin_tauti_1/

nenänielun syöpä (nsofaryngeaalinen karsinoma NPC)

ja immunoblastinen lymfoma immuniteetiltään heikentyneissä yksilöissä.

Mutta useimmissa immuniteetiltaan terveissä henkilöissä virus pysyttelee koko elämän latentisti infektoituneissa lepäävissä B-imusoluissa, jotka ovat muistisoluja, aiheuttamatta mitään oireita.

Koeputkessa EBV-pystyy muuttamaan lepääviä B-soluja aktiiveiksi lymfoblasteiksi. Tällaiset aina jakaantuvat solut ilmentävät virusantigeenikirjoa (EBNA-6 ja LMP-1, Latent Membrane proteins ), josta kaikki ovat suoraan osallistumassa immortalisaatioprosessiin. Aivan heti infektion jälkeen Wp ilmentää ( latentteja geenejä) EBNA-2 ja EBNA-5 . Vaihde Cp promoottorille tapahtuu 36 tunnin päästä. Transkriptio tästä ylävirtaan sijaitsevasta C promoottorikohdasta käsin johtaa kaikkien polycistronisesta yksiköstä peräisin olevien EBNA-muotojen transkriptioon siten pilkkoutuen, että geeniluennasta koodautuu erilaisia EBNA proteiineja. EBNA-1 muodostaa multippeleja homodimeerejä, jotka sitoutuvat replikaation latenttisuuden (piilevyyden) alkuperäkohtaan (oriPI), mikä toimii EBNA-1:stä riippuvana C-promoottorikohdan kiihdyttäjänä. Ei ole täysin ymmärretty aiemmin tämän interaktion molekyylitason mekanismia tässä oriPI –EBNA-1 kompleksin ja C-promoottorin välillä.

EBNA-1 ei osoita mitään ilmiselviä entsymaattisia aktiivisuuksia ja arvellaan, että se täyttää tehtävänsä välittämällä interaktioita joillekin spesifisille solussa oleville isäntäproteiineille, joista vain harvoja on luonnehdittu.

Käsillä olevan vaitöskirjan tarkoituksena on ollut identifioida ja luonnehtia tämän makromolekulaarisen kompleksin interaktiopartnereita. Transkriptiotekijän NF-Y ja Sp1 interaktiot ( vuorovaikutukset) C-promoottorin proksimaaliseen alueeseen oli jo aiemmin määritelty tässä laboratoriossa.

(I) Työn ensimmäisessä osassa tutkittiin näitä interaktioita edelleen käyttäen tilapäisiä transfektioita ja varmistettiin, että NF-Y ja Sp1 proteiinit stimuloivat yhdessä C-promoottoria (Cp). Varmistettiin myös, että oriPI-EBNA1 kompleksin aiheuttamassa Cp transaktivaatiossa täytyy välttämättä myös ilmetä samanaikaisesti nämä molemmat proteiinit.NF-Y ja Sp1

(II) Edelleen käytettäessä lymfoblastoidista solulinjaa ( EREB2-5), jossa EBNA-2 funktio on estrogeenisäätöinen, voitiin osoittaa EBNA-2-inaktivaation johtavan NF-Y esiintymään vähenemiseen ja C promoottorin vaimennussäätöön.

Lisäksi kun tiedetään, että lepäävissä soluissa NF-Y ei esiinny ja ottaen huomioon että se vaaditaan kuitenkin C-promoottorin aktivaatioon, tutkijat olivat sitä mieltä, että sen postinfektionelli lisääntymään säätyminen voi osaltaan vaikuttaa Wp- Cp vaihteen primäärissä EBV infektiossa. OriPI sisältää 20 toistodomeenia, jotka sitovat EBNA-1:tä.

Functional Interaction of Nuclear Factor Y and Sp1 is Required for Activation of the Epstein-Barr virus C promoter. Boreström, C., Zetterberg, H., Liff, K., and Rymo, L. Journal of Virology (2003) 77(2): p. 821-9

(II) Työn toisessa osassa tutkijat käyttivät sarjoja oriPI deleetioita ( oriPI-CpCAT reportteriplasmideissa) ja tilapäisiä transfektioita. Sitten he määrittivät EBNA-1 sitovien toistokohtien sen lukumäärän, mikä tarvitaan, jotta Cp välitteinen transaktivaatio olisi tehokas. He pystyivät osoittamaan, että välttämätöntä on 8 tai useamman toistokohdan olemassaolo tälle vaikutukselle. mikä korostaa transaktivaatioprosessin kompleksisuutta

Multiple EBNA1-binding sites within oriPI are required for EBNA1- dependent transactivation of the Epstein-Barr virus C promoter. Zetterberg, H., Boreström, C., Nilsson, T., and Rymo, L. International Journal of Oncology (2004) 25 (3): p 693-6

(III) ja (IV) Näissä työosuuksissa oli tarkoituksena identifioida uusia vaikuttavia partnereita oriPI ja 170 Cp alueissa. Voitiin identifioida kolme uutta proteiini-interaktiota oriPI ja C promoottorin kesken. Nämä kolme proteiinia (Bright (B-cell regulator of Ig H, transkriptiofactor), E2F1 ja Oct-2) näyttivät sitovan molempia sekvenssejä koeputkessa ja in vivo ja tästä aukeni mahdollisuus yhteyden välitykseen oriPI:n ja C promoottorin kesken.

Näiden kolmen proteiinin sitoutumiskohdat kartoitettiin C promoottorissa erääseen lyhyeeseen segmenttiin hyvin lähelle toisiaan. Tämän alueen oli jo aiemmin osoitettu olevan essentielli sekä oriPI:stä riippuville että siitä riippumattomille transkriptionaalisille aktiivisuuksille, mikä viittaa siihen, että interaktio on tärkeä C promoottorin aktiivisuudelle.

Hetkellisin transfektioin osoitettiin , että exogeeninen Oct-2 ja Bright ilmentymä sääti ylös oriPI riippuvaisen C promoottorin aktivaation, kun EBNA-1 ei ollut läsnä.

Lopuksi osoitettiin että endogeeninen Bright ilmenemä korreloi latenssiasteen III malliin, mutta ei latenssiasteitten I ja II ilmentymismalleihin EBV positiivisssa solulinjoissa. Tämä viittaisi edelleen siihen, että Bright ilmenemä ( B-solujen säätelemä IgH transkriptio) olisi tärkeä tekijä C promoottorin transkriptioaktiivisuudessa kehossa.

Functional Interaction of Oct transcription factors with the Family of Repeats in Epstein-Barr virus oriP. Almqvist, J., Zou, J., Linderson, Y., Boreström, C., Altiok, E., Zetterberg, H., Rymo, L., Pettersson, S., and Ernberg, I. Journal of General Virology (2005) 86(5): p. 1261-7

Bright, E2F1 and Oct-2 bind the Epstein-Barr virus C promoter and the oriPI, linking the promoter to the enhancer Boreström, C., Rüetschi, U., and Rymo, L. In manuscript (2008)

Kuvia viruksesta:
www.abc.net.au/.../news/img/health/ebv020306.jpg
www-ermm.cbcu.cam.ac.uk/06010568h.htm