Tämä analyysi on julkaistu PubMed artikkelina alkuvuodesta 2014:
LÄHDE:
MBio. 2014 Jan 28;5(1):e00862-13. doi: 10.1128/mBio.00862-13.
Comprehensive functional analysis of N-linked glycans on Ebola virus GP1.
Suomennosta tiivistelmästä, Abstract
Ebolaviruksen sisäänpääsy soluun vaatii virion pinnan glykoproteiinin apua. GP on koostunut treimeeristä joaas on heterodimeerejä GP1/GP2. (peplomeeri).
GP1 alayksikössä on kaksi hyvin vahvasti glykosyloitnutta domeenia, glykaani Gap ja musiinin kaltainen domaani (MLD)
Ebolaviruksen sisäänpääsy soluun vaatii virion pinnan glykoproteiinin apua. GP on koostunut treimeeristä joaas on heterodimeerejä GP1/GP2. (peplomeeri).
GP1 alayksikössä on kaksi hyvin vahvasti glykosyloitnutta domeenia, glykaani Gap ja musiinin kaltainen domaani (MLD)
Ebola virus (EBOV)
entry requires the virion surface-associated glycoprotein (GP) that is
composed of a trimer of heterodimers (GP1/GP2). The GP1 subunit contains
two heavily glycosylated domains, the glycan cap and the mucin-like
domain (MLD). The glycan cap contains only N-linked glycans, whereas the
MLD contains both N- and O-linked glycans.
Glykaani gap-domeeni-alueella on vain N-linkkiytyneitä glykaaneja ( aspartaattiin -N-) , kun taas musiininkaltaisesssa domaanissa on sekä N-linkkiytyneitä että O-linkkiytyneitä glykaaneja. ne linkkiytyvät seriinin tai treoniinin happimolekyyliin -O- .
Tutkijat katkaisivat systemaattisesti N-linkkiytyneitä glykaanirakenteita EBOV GP1 molekyylistä N-kohtiin suunnatuilla spesifisillä mutageneeseillä saadakseen käsitystä niiden osuudesta GP-rakenteessa ja funktiossa.
Glykaani gap-domeeni-alueella on vain N-linkkiytyneitä glykaaneja ( aspartaattiin -N-) , kun taas musiininkaltaisesssa domaanissa on sekä N-linkkiytyneitä että O-linkkiytyneitä glykaaneja. ne linkkiytyvät seriinin tai treoniinin happimolekyyliin -O- .
Tutkijat katkaisivat systemaattisesti N-linkkiytyneitä glykaanirakenteita EBOV GP1 molekyylistä N-kohtiin suunnatuilla spesifisillä mutageneeseillä saadakseen käsitystä niiden osuudesta GP-rakenteessa ja funktiossa.
Site-directed mutagenesis
was performed on EBOV
GP1 to systematically disrupt N-linked glycan sites to gain an
understanding of their role in GP structure and function.
- Kaikki 15 N-glykosylaatiokohtaa voitiin poistaa aiheuttamatta GP1 molekyylin kompromittoitumsita. Näiden 15 glykosylaatiorakennelman irrotaminen tehosti merkitsevästi pseudovirionin johtumsita tutkimuksessa käytettyihin soluihin, mikä korreloi proteaasiherkkyyden kasvuun. Mielenkiintoinen havainto oli se, että kun reseptoria sitova domaani (RBD) oli paljastunut glykaanikilven irrottua , se ei pystynyt interaktioon endosomaalisen reseptorin NPC1 kanssa, mikä viittaa siihen, että glykaani gap/MLD domeenit kätkevät RBD- aminohappotähteitä, jotka ovat sitoutumisessa tärkeitä
All 15
N-glycosylation sites of EBOV
GP1 could be removed without compromising the expression of GP. The
loss of these 15 glycosylation sites significantly enhanced pseudovirion
transduction in Vero cells, which correlated with an increase in
protease sensitivity. Interestingly, exposing the receptor-binding
domain (RBD) by removing the glycan shield did not allow interaction
with the endosomal receptor, NPC1, indicating that the glycan cap/MLD
domains mask RBD residues required for binding.
- Sitten testattiin vaikutusta kalsiumista riippuviin C-lektiineihin CLEC. Jos N-linkkiytyneet glykaanit oli poistettu, vaikutus viruksen transduktioon oli monimutkainen, ja kaikille tutkituille CLEC lektiineille ainutlaatuinen.
The effects of the loss
of GP1 N-linked glycans on Ca(2+)-dependent (C-type) lectin
(CLEC)-dependent transduction were complex, and the effect was unique
for each of the CLECs tested.
- EBOV viruksen pääsy hiiren vatsaontelon makrofageihin riippui GP1 N-glykaanista, mikä viittaisi siihen että CLEC-GP1 N-glykaanin vuorovaikutusta ei tarvitaisi tähän tärkeään primääriin soluun pääsyyn.
Surprisingly, EBOV
entry into murine peritoneal macrophages was independent of GP1
N-glycans, suggesting that CLEC-GP1 N-glycan interactions are not
required for entry into this important primary cell.
- Lopuksi tutkijat selvittivät miten GP1 N-glykaanien poisto musiininkaltaisen alueen ulkopuolelta tehosti antiseerumi- ja vasta-aineherkkyyttä. Yhteenvetona tulokset osoittivat , että konservoitunut N-linkkiytynyt glykaanikilpi EBOV-GP1 ydinrakenteessa suojelee vasta-aineitten neutraloivalta vaikutukseslta vaikkakin siitä seuraa virukselle negatiivisesta vaikutuksesta soluun sisäänpääsyn tehokkuuden suhteen.
Finally, the
removal of all GP1 N-glycans outside the MLD enhanced antiserum and
antibody sensitivity. In total, our results provide evidence that the
conserved N-linked glycans on the EBOV GP1 core protect GP from antibody neutralization despite the negative impact the glycans have on viral entry efficiency.
Filovirus outbreaks occur sporadically throughout central Africa, causing high fatality rates among the general public and health care workers. These unpredictable hemorrhagic fever outbreaks are caused by multiple species of Ebola viruses, as well as Marburg virus. While filovirus vaccines and therapeutics are being developed, there are no licensed products. The sole viral envelope glycoprotein, which is a principal immunogenic target, contains a heavy shield of glycans surrounding the conserved receptor-binding domain. We find that disruption of this shield through targeted mutagenesis leads to an increase in cell entry, protease sensitivity, and antiserum/antibody sensitivity but is not sufficient to allow virion binding to the intracellular receptor NPC1. Therefore, our studies provide evidence that filoviruses maintain glycoprotein glycosylation to protect against proteases and antibody neutralization at the expense of efficient entry. Our results unveil interesting insights into the unique entry process of filoviruses and potential immune evasion tactics of the virus.
Mikä on asian merkitys? IMPORTANCE:
Filoviruspurkauksia tapahtuu sporadisesti kautta Keski-Afrikan ja ne aiheuttavat korkeaa kuolleisuutta väestössä ja terveydenhoitoalan työntekijöissä. Nämä ennalta arvaamattomat verenvuotokuumepurkaukset johtuvat monista ebolaviruksista kuten marburviruksestakin. Filovirusrokotteita ja terapiamuotoja kehitellään eikä varsinaista lukkoonlyötyä tuotetta vielä ole. Yksittäinen virusglykoproteiini, joka on pääsiallinen immunogeeninen kohdemolekyyli, sisältää erittäin vahvan glykaanikilven konservoidun reseptoriasitovan domeeninsa ympärillä. Tutkijat havaitsivat, että tämän glykaanikilven repäisy pois kohdennetulla mutageneesillä johtaa viruksen lisääntyneeseen soluun pääsyyn, proteaasisensitiivisyyteen ja antiseerum/ vasta-aine herkkyyteen, muttariittää estämään viruksen sitoutumisen solunsisäiseen reseptoriinsa NPC1. Sentakia nämä tutkimukset antavat näyttöä siitä, että filovirukset pitävät yllä glykoproteiiniglykosylaatioaan suojatakseen itseään proteaaseilta ja vasta-aineiden aiheutamalta neutralisaatiolta, muta tehokkaan sisäänpääsyn kustannuksella. Tutkijoiden tulokset paljastavat mielenkiintoisia oivalluksia filoviruksista ja niiden ainutlaatuisesta soluun sisäänmenoprosessista ja mahdollisista immunoevaasiotaktiikoista. .Filovirus outbreaks occur sporadically throughout central Africa, causing high fatality rates among the general public and health care workers. These unpredictable hemorrhagic fever outbreaks are caused by multiple species of Ebola viruses, as well as Marburg virus. While filovirus vaccines and therapeutics are being developed, there are no licensed products. The sole viral envelope glycoprotein, which is a principal immunogenic target, contains a heavy shield of glycans surrounding the conserved receptor-binding domain. We find that disruption of this shield through targeted mutagenesis leads to an increase in cell entry, protease sensitivity, and antiserum/antibody sensitivity but is not sufficient to allow virion binding to the intracellular receptor NPC1. Therefore, our studies provide evidence that filoviruses maintain glycoprotein glycosylation to protect against proteases and antibody neutralization at the expense of efficient entry. Our results unveil interesting insights into the unique entry process of filoviruses and potential immune evasion tactics of the virus.
- Suom. 26.14.2014
Inga kommentarer:
Skicka en kommentar